profoldin VRT100K簡(jiǎn)介

病毒 RNA 依賴性 RNA 聚合酶試驗(yàn)是使用黃病毒科（陽性、單鏈、包膜 RNA 病毒家族）中的 RNA 聚合酶開發(fā)的。該測(cè)定法基于在存在 NTP 的情況下，以 RNA 為模板，測(cè)定由 RNA 聚合酶合成的 RNA 分子。該試驗(yàn)可在 384 孔或 96 孔板中進(jìn)行，用于檢測(cè)黃病毒科 RNA 聚合酶的酶活性和高通量篩選抑制劑。

病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測(cè)試劑盒-100（目錄號(hào)VRT100K）包括 350µl 10 x 緩沖液、33µl 100 x 模板、33µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 330µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 100 次測(cè)定。檢測(cè)試劑盒包括除酶以外的所有試劑。

病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測(cè)試劑盒-500（目錄號(hào)VRT500K）包括 1550µl 10 x 緩沖液、160µl 100 x 模板、160µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 1550µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 500 次測(cè)定。檢測(cè)試劑盒包括除酶以外的所有試劑。

參考文件

Shu Yang 等人，Emetine 通過抑制病毒復(fù)制和減少病毒進(jìn)入兩種分子機(jī)制抑制寨卡和埃博拉病毒感染，Cell Discovery，第 4 卷，貨號(hào)：31，（2018 年 6 月 5 日）。

試驗(yàn)方案

以下試驗(yàn)方案基于 384 孔板試驗(yàn)格式（板類型：Matrix 4318 或類似）。反應(yīng)體積為 30 l，終測(cè)定體積為 60 l。對(duì)于 96 孔板測(cè)定（板類型：Costar 3915 或相似物），反應(yīng)體積為 60 l，終測(cè)定體積為 120 l。

1. 反應(yīng)：

各反應(yīng)混合物的總體積為 30 l，包括 26.1 lH2O、3 l10 x 緩沖液、0.3 l100 x 模板、0.3 l100 xRNA 聚合酶和 0.3 l100 xNTP。將反應(yīng)混合物在 37 ℃ 下孵育 60 min。

2. 檢測(cè)：

用水稀釋 10x 熒光染料，制成 1x 染料。將 30 l1 x 染料與 30 l 反應(yīng)混合物混合。使用 485 nm 激發(fā)波長(zhǎng)在 5 min 內(nèi)測(cè)量 535 nm 處的熒光強(qiáng)度。

酶抑制試驗(yàn)方案

該測(cè)定法可在測(cè)定窗口、測(cè)定法線性和對(duì)競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的靈敏度方面進(jìn)行優(yōu)化。ProFoldin 提供 HTS 分析開發(fā)服務(wù)。

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