encapsula IMD-1011說明書

Immunodox®-Folate (PEGylated)

SKU# IMD-1011

描述

葉酸Immunodox®（聚乙二醇化）

脂質(zhì)組成	濃度（mg / ml）	濃度（mM）	摩爾比百分比
氫化大豆PC	9.58	12.22	57
膽固醇	3.19	8.25	38
DSPE-聚乙二醇（2000）	2.7	0.96	4.5
DSPE-PEG（2000）-葉酸鹽	0.39	0.12	0.5
全部的	15.86毫克/毫升	21.55毫米	100

結(jié)合方案

材料和設(shè)備

為了將用FBP標(biāo)記的抗體或蛋白質(zhì)與Immunodox®-葉酸脂質(zhì)體偶聯(lián)，您需要：

1. 建議使用實(shí)驗(yàn)室渦旋混合器。
2. 透析需要實(shí)驗(yàn)室磁力攪拌器。
3.  具有適當(dāng)MWCO的Float-A-Lyzer®可以輕松清除游離和非結(jié)合蛋白/肽/配體的脂質(zhì)體結(jié)合配體。您需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時(shí)，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒。在使用離心柱或透析盒之前，請先了解該技術(shù)。如果未使用正確的MWCO，則可能會失去全部準(zhǔn)備。對于此協(xié)議，我們建議MWCO為300,000道爾頓。

制備方法

1. 葉酸中的總脂質(zhì)濃度為21.55 mM。脂質(zhì)體中0.5％mol的脂質(zhì)包含PEG-葉酸酯基團(tuán)，并且只有一半暴露于脂質(zhì)體的外部，這等于0.053 mM的反應(yīng)性結(jié)合脂質(zhì)。對于2ml體積的脂質(zhì)體，其等于1.08×10 ^-7 mol，對于5ml體積的脂質(zhì)體，其等于2.69×10 ^-7 mol的PEG-葉酸酯。 將FBP標(biāo)記的抗體與PEG-葉酸酯脂質(zhì)的摩爾比添加為1:20。
2. 在室溫下將Immunodox®-Folate與抗體-FBP一起孵育1小時(shí)。
3. 透析除去非結(jié)合的抗體，蛋白質(zhì)，肽或配體。與尺寸排阻色譜柱相比，我們更喜歡透析。透析的過程要慢得多，但是從非結(jié)合蛋白/多肽/配體中清除了制備物后，免疫脂質(zhì)體的損失將降低。旋轉(zhuǎn)柱要快得多，但您很容易損失掉旋轉(zhuǎn)柱上50％以上的脂質(zhì)體。我們建議使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根據(jù)蛋白質(zhì)，配體，抗體或抗體片段的分子量選擇合適的MWCO盒。 筆記：如果決定使用透析盒，則需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時(shí)，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒和離心柱。它們有各種尺寸，您需要明智地選擇正確的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂質(zhì)體溶液8小時(shí)。用新鮮的1升PBS更換透析緩沖液，再透析8小時(shí)。完成此步驟后，即可使用旋轉(zhuǎn)柱或透析盒來使用已清理的免疫脂質(zhì)體。如果未使用正確的MWCO，則可能會失去全部準(zhǔn)備。

脂質(zhì)體顆粒計(jì)算器

Immunodox®脂質(zhì)體是單層的，尺寸為100 nm。脂質(zhì)體的摩爾濃度為21.55mM。通過具有 脂質(zhì)體直徑（nm）和脂質(zhì)濃度（µM），您可以計(jì)算出一個(gè)脂質(zhì)體中脂質(zhì)的總數(shù)和一毫升脂質(zhì)體溶液中脂質(zhì)體的數(shù)目。要使用計(jì)算器，請單擊 此處。

技術(shù)說明

• 阿霉素是具有_λex 470 nm和_λem 585 nm的熒光分子。如果您在抗體或配體上使用熒光標(biāo)簽，則需要確保它們不會互相干擾。
• 請記住，表面含有葉酸的脂質(zhì)體的主要用途是靶向細(xì)胞上的葉酸受體。使用標(biāo)記有FBP的抗體/蛋白質(zhì)或配體制備免疫脂質(zhì)體是非常利基的應(yīng)用。
• 由于暴露于低pH下葉酸和FBP之間的親和力降低，免疫脂質(zhì)體在暴露于內(nèi)體小室的低pH環(huán)境后通過內(nèi)吞作用而被內(nèi)在化后可能會解體。通過允許將內(nèi)化的脂質(zhì)體分選到適當(dāng)?shù)膩喖?xì)胞區(qū)室和/或促進(jìn)藥物分子從脂質(zhì)體的細(xì)胞內(nèi)釋放，這種內(nèi)化觸發(fā)的解偶聯(lián)可能有益于在細(xì)胞水平上遞送脂質(zhì)體藥物。
• 可以使用尺寸排阻旋轉(zhuǎn)柱（例如Sepharose®CL-4B）代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是，在純化過程中，大量的脂質(zhì)體會粘在色譜柱上，因此我們強(qiáng)烈建議使用透析法，而不是使用大小排他的珠子。
• 如果您使用的是疏水的配體或肽，則建議將其溶解在DMSO或DMF中，然后向其中添加緩沖液。建議溶液中使用的DMSO或DMF量不超過5％。DMF和DMSO均與脂質(zhì)體相容，并且也可與水混溶。其他有機(jī)溶劑（例如乙醇和氯方）與脂質(zhì)體不相容，會導(dǎo)致脂質(zhì)體裂解。如果終使用DMSO或DMF，那么在完成偶聯(lián)反應(yīng)后，您需要從脂質(zhì)體中除去DMSO和DMF。為此，您需要使用由再生纖維素膜制成的透析盒。注意：并非所有膜都與DMF和DMSO兼容。我們建議使用Slide-A-Lyzer™MINI透析設(shè)備 由ThermoFisher生產(chǎn)的再生纖維素膜制成的MWCO為2K。去除DMSO或DMF后，您可以使用Float-A-Lyzer®透析設(shè)備進(jìn)行清理準(zhǔn)備的后一步。
• 脂質(zhì)體應(yīng)保持在4°C且切勿冷凍。