線性聚乙烯亞胺PEI MW40000說明書

產(chǎn)品描述

BIOHUB 線性聚乙烯亞胺PEI MW40000 轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產(chǎn)品，因其較高的轉染效果，已廣泛應用于AAV，LV和重組蛋白等工業(yè)化生產(chǎn)。

聚乙烯亞胺是一種具有較高陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔兩個碳原子，即每第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿"體(proton sponge)，因此，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成帶正電荷的復合物顆粒，該顆粒與細胞表面陰離子結合，很容易通過內吞作用進入細胞；并且可抵御溶酶體的降解作用，從而提高核酸分子的表達水平。

相關貨號：

基本信息

CAS 49553-93-7

分子式 (C2H5N)n . xHCl

分子量 40,000 (~22,000 free base)

熔點 73-75℃

溶解性 溶于冷水

不溶于 常用有機溶劑（乙醇、丙酮、四氫呋喃）

形式 白色固體粉末

生物毒性 未知

安全防護 手套，護目鏡，口罩

存儲 粉末至少可以保存一年， PEI內含自由氨基，建議開封后4℃干燥保存，減緩氧化過程。

運輸 常溫運輸

特點 大量實驗數(shù)據(jù)反饋，細胞通用性好，有非常好的轉染效果，尤其對293，CHO細胞系有特別顯著的轉染效果。

配置方法

轉染操作流程：(貼壁細胞轉染方法)

1. 接種細胞： 轉染前一天，用膠原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔加入的細胞量參考下圖表1，一般18-24小時（sf9細胞為3-4小時）后轉染。轉染時細胞匯合度應至少達到 70~80%以上。轉染前更換為含5%血清的生長培養(yǎng)基。

2. 準備 DNA-PEI 復合物： DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。 （稀釋PEI和DNA的體積為培養(yǎng)體積的1/10-1/20, DNA濃度為1ug/ml）

3. 轉染細胞： 直接向每個孔中加入 DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。轉染4-6小時（sf9細胞為2小時 )后，更換為生長培養(yǎng)基。

4. 孵育細胞和分析結果： 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后最快 7 h 即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。

5. 轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋 10 倍 以上），在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約 1~2 周可 篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

轉染操作流程：(懸浮細胞轉染方法)

1. 轉染前準備：懸浮細胞傳代接種于適量含懸浮細胞生長培養(yǎng)基中，合適條件下培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)瓶大小調整細胞密度（例100mL培養(yǎng)瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋緊瓶口放入搖床繼續(xù)培養(yǎng)，2~4小時后可以進行轉染。

2. 準備 DNA-PEI 復合物：DNA、PEI 試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他適合的無血清培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋 PEI 試劑。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成 DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 離心管。

3. 轉染細胞：將PEI-DNA轉染復合物逐滴加入到細胞培養(yǎng)液中，搖勻后旋緊瓶口放回搖床合適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至可以分析檢測。

4. 孵育細胞和分析結果：轉染后一般24-72h即可檢測到轉入基因的表達。 請自行確定適合的檢測時間。

5. 如果要獲得更多的蛋白產(chǎn)量，有文獻表明轉染后24小時，可以適當稀釋細胞，稀釋比例參考范圍（1:2—1:5）之間，可以增加蛋白產(chǎn)量，稀釋效應與最佳稀釋比率應根據(jù)經(jīng)驗確定。

產(chǎn)品背景

        BIOHUB 生產(chǎn)的78Bio PEI是一種優(yōu)化的線性陽離子聚合物轉染試劑,分子量分別為 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 轉染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表達系統(tǒng)中，相比于市面上的脂質體 78BioPEI 都表現(xiàn)出高的蛋白表達量（無 論是 96 孔板還是 100L 的細胞反應器），以及更小的細胞毒性、更高的轉染效和更高的可 重復性，并且十分經(jīng)濟的高性價比轉染試劑。產(chǎn)品具有以下特點：

1.轉染效率高，細胞毒性低；  蛋白表達量高；

2.節(jié)約成本：BIOHUB 78 PEI轉染試劑 ，進口品質，親民價格，至少能夠降 40% 的轉染試劑總成本；

3.適用于 HEK293 等真核細胞的轉染；

4.適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉染；

5.適用于有血清和無血清的轉染條件；

6. 無機試劑，無動物源成分；

7. 產(chǎn)品穩(wěn)定，質控嚴格；

8. 工藝流程適用范圍廣，容易優(yōu)化 適合小規(guī)模培養(yǎng)板，培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。

產(chǎn)品反饋

注意事項

  1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

  2. 本產(chǎn)品主要用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

  3.加熱或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。當然酸可能不用加那么多，詳細用量可試加一點 ,攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。 

  4.一定要溶解充分，溶解不充分會影響后續(xù)的轉染效率.

  5.冷凍后可能會影響其后續(xù)轉染效果。

  特別提醒：初次使用 78PEI 進行不同基因轉染時應先做預試，優(yōu)化出適合自己實驗的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常篩選范圍在 1:1 到 5:1 之間，如果之前用過Polysciences品牌的 PEI，用 78BioPEI 時應適當降低使用濃度。