【一、品牌與公司定位】

AssayQuant Technologies 是一家聚焦生物醫藥研發領域的生物技術企業，由來自麻省理工學院的科研團隊發起創立，核心方向集中于蛋白激酶與蛋白磷酸酶的活性檢測方案開發。公司圍繞自主搭建的 PhosphoSens 技術平臺，構建了從熒光傳感器肽底物到完整檢測試劑盒的產品矩陣，服務于基礎科研、藥物篩選、先導化合物優化以及作用機制研究等多個環節。

與行業中普遍采用的偶聯酶法、放射性法或抗體依賴型檢測不同，AssayQuant 的技術路徑選擇在底物層面做文章——通過在肽段中嵌入專屬設計的 Sox 熒光基團，讓磷酸化事件本身直接轉化為熒光信號的變化。這一思路讓檢測流程回歸"催化行為本身"，減少了二次反應、抗體結合或洗滌步驟帶來的噪聲與偏差。目前，該平臺已覆蓋超過 600 個激酶與磷酸酶靶點，配套熒光肽底物庫規模超過 50,000 條序列，并被多篇同行評審文獻引用。

【二、核心優勢】

▲ 底物源自天然序列

傳感器肽段基于生理狀態下的真實激酶/磷酸酶識別序列優化而來，而非在人工序列上強加賴氨酸、氨酸或大分子報告基團。這樣的設計讓酶與底物的相互作用更貼近體內情形，生化實驗數據與細胞水平結果之間的相關性更穩健。

▲ 信號機制直接

采用螯合增強熒光（ChEF）原理，Sox 熒光團本身不參與信號放大，只在磷酸化發生后因與鎂離子及磷酸根螯合而改變熒光輸出。整個過程不需要偶聯酶、不需要抗體、不需要洗滌，屬于均相"加樣-讀板"流程。

▲ 兩種互補讀取格式

連續熒光強度（FI）格式適合機制研究、動力學參數求解；紅移時間分辨熒光（TRF）格式以銪離子置換鎂離子，將發射波長移至 620 nm 左右，可避開化合物自身熒光干擾，更適合高通量篩選。

▲ 兼容常規設備與多規格板型

檢測可在 96 孔、384 孔、1536 孔板上開展，讀取端僅需配備常見熒光通道的酶標儀，無需添置專屬硬件。

▲ 適配多樣品類型

無論純化重組酶、免疫沉淀激酶、還是粗制細胞/組織裂解物，同一套傳感器均可工作，且對 ATP 濃度沒有硬性限制，可依據實驗設計自行調整。

▲ 數據維度豐富

連續讀取模式下可每 30 秒至數分鐘采集一次信號，完整呈現反應曲線，支持 IC??、K?、k???c?/K?、停留時間等動力學參數計算，也能通過跳躍稀釋實驗區分可逆與不可逆抑制模式。

【三、代表性產品介紹】

▌產品一：連續熒光強度激酶檢測試劑盒（PhosphoSens-Kinetic 系列）

● 品名：連續熒光強度激酶檢測試劑盒

● 產品特點

?? 基于 PhosphoSens 傳感器肽底物，磷酸化后熒光強度隨產物累積線性上升

?? 激發約 360 nm，發射約 485 nm，可在常規熒光酶標儀上讀取

?? 支持純化酶與粗裂解物兩類樣品

?? 反應為均相加樣-讀板模式，無洗滌、無偶聯酶

?? Z' 因子通常優于 0.7，批次間一致性穩定

?? 同一傳感器可在連續模式與終點模式間切換（終點模式需補加銪離子）

● 存儲條件

?試劑盒各組份收貨后按標簽指示溫度存放，傳感器肽底物與酶組份建議避光、-20℃ 保存，避免反復凍融；ATP 與鎂離子組分按說明書常溫或 4℃ 存放即可。

● 工作原理

?將 Sox 熒光團通過 Fmoc-Cys-Sox（CSx）構建塊定點接入肽段磷酸化位點鄰近位置。反應體系中加入激酶、ATP 與 Mg2? 后，底物被磷酸化，磷酸根與 Sox 上的螯合位點結合 Mg2?，觸發螯合增強熒光效應，熒光強度與磷酸化產物量成正比。因信號來自底物本身的化學變化，無需二級檢測試劑。

● 使用方法

?① 按實驗設計在酶標板各孔中加入緩沖液、傳感器肽底物、待測激酶或裂解物；

?② 加入含 Mg2? 的 ATP 溶液啟動反應，輕微振蕩混勻；

?③ 將酶標板置入讀板機，設定激發 360 nm、發射 485 nm，按所需時間間隔連續采集熒光；

?④ 以時間-熒光曲線擬合反應速率，進一步計算 IC??、K? 等參數；

?⑤ 若需轉為紅移終點讀取，在反應結束時補加 Eu3? 溶液，靜置數分鐘后改用 620 nm 通道采集。

▌產品二：紅移時間分辨熒光激酶檢測試劑盒（PhosphoSens-Red 系列）

● 品名：紅移時間分辨熒光激酶檢測試劑盒

● 產品特點

?? 在同一 Sox 傳感器基礎上，以銪（Eu3?）替代 Mg2? 參與終止與信號轉換

?? 激發約 360 nm，發射約 620 nm，屬時間分辨熒光（TRF）讀取

?? 通過延遲采集（通常約 100 μs 延遲）避開化合物自發熒光與背景散射

?? 適合化合物文庫初篩、SAR 循環中對背景干擾敏感的項目

?? 可與連續 FI 模式共用同一套傳感器，方法遷移成本低

● 存儲條件

?傳感器肽底物避光、-20℃ 保存；Eu3? 終止液按說明書 4℃ 存放；其余組份參照試劑盒內標簽溫度指示。

● 工作原理

?前期激酶反應階段與連續 FI 試劑盒一致，底物磷酸化后 Sox 產生熒光。反應進行到預設時間點后，加入含 Eu3? 的終止/轉換液，Eu3? 與磷酸化 Sox 形成紅移絡合物，此時以時間分辨模式讀取 620 nm 處發射信號。因 TRF 本身通過延遲門控剔除短壽命背景熒光，測試化合物自身的熒光基團不再構成干擾。

● 使用方法

?① 酶標板中各孔加入緩沖液、傳感器肽底物、激酶及樣品；

?② 加入 ATP/Mg2? 啟動反應，按篩選節奏設定孵育時長；

?③ 孵育結束時每孔加入 Eu3? 轉換液，避光靜置使絡合完成；

?④ 酶標儀切換至 TRF 通道，激發 360 nm、發射 620 nm、延遲約 100 μs 采集；

?⑤ 以終點熒光值歸一化后計算抑制率，繪制劑量-響應曲線。

▌產品三：連續熒光強度磷酸酶檢測試劑盒（PhosphoSens-Phosphatase 系列）

● 品名：連續熒光強度磷酸酶檢測試劑盒

● 產品特點

?? 原理與激酶版本對稱——以已磷酸化的 Sox 傳感器肽為底物，磷酸酶去磷酸化后熒光衰減

?? 熒光強度隨時間下降的速率直接反映磷酸酶催化活性

?? 同樣支持純化磷酸酶與粗裂解物，同樣為均相加樣-讀板

?? 適用于 PTP 家族、SHP 家族、PP 系列等磷酸酶靶點

?? 可配合抑制劑梯度做 IC?? 與選擇性評價

● 存儲條件

?預磷酸化傳感器肽底物避光、-20℃ 保存，避免反復凍融；磷酸酶反應緩沖液與輔因子組份按標簽 4℃ 存放。

● 工作原理

?試劑盒提供的傳感器肽段在出廠前已完成 Sox 位點磷酸化。加入磷酸酶后，磷酸根被水解脫落，Sox 螯合結構被破壞，熒光強度隨之下降。熒光衰減的斜率即為磷酸酶催化速率，全程無需偶聯酶或顯色/放免檢測。

● 使用方法

?① 酶標板中各孔加入反應緩沖液與預磷酸化傳感器肽底物；

?② 加入待測磷酸酶樣品（純化酶或裂解物）啟動反應；

?③ 酶標儀設定激發 360 nm、發射 485 nm，連續采集熒光衰減曲線；

?④ 以初始速率擬合酶活性，或通過抑制劑梯度得到 IC??；

?⑤ 若樣品背景熒光較高，可參照激酶紅移思路在終點加入 Eu3? 轉為 TRF 讀取。

【四、在實驗中能解決哪些問題】

傳統激酶/磷酸酶檢測常讓科研與篩選人員遇到以下幾類困擾，而 PhosphoSens 平臺在設計時正是針對這些點做了調整：

▲ 偶聯酶法帶來的噪聲與滯后

許多商用試劑盒依賴偶聯酶級聯（如 pyruvate kinase/lactate dehydrogenase 耦聯 ATP 消耗至 NADH 吸光度），級聯每一步都引入變異系數，且對樣品中可能存在的代謝物敏感。PhosphoSens 省去偶聯環節，信號只來自底物本身。

▲ 抗體依賴型檢測的通量與成本壓力

HTRF、AlphaScreen 等需磷酸化特異抗體與供/受體對，抗體批次差異、樣品中內源 IgG 干擾、以及每孔試劑成本，都是長期篩選中繞不開的問題。PhosphoSens 以化學熒光團取代抗體，均相讀取也更適配 1536 孔擴展。

▲ 放射性法的合規與操作負擔

33P-ATP 類方法數據質量高，但涉及同位素采購、廢液處理、人員防護，對多數實驗室并不友好。熒光法在保持連續動力學能力的同時避開了放射性。

▲ 化合物自身熒光導致假陽性

在化合物文庫篩選中，部分分子自帶熒光或在 485 nm 附近有吸收，會壓低或抬高讀數。紅移 TRF 格式將發射移至 620 nm 并加延遲門控，可顯著壓低這類干擾。

▲ 粗裂解物背景高、讀數不穩

細胞/組織裂解物中含大量蛋白與代謝物，對偶聯酶法與顯色法都不友好。PhosphoSens 傳感器尺寸小、疏水性低，且在序列層面已針對靶點優化，在裂解物體系中仍可得到可擬合的反應曲線。

▲ 難以區分可逆與不可逆抑制

多數終點法只能給一個 IC??，無法判斷抑制劑是否共價結合。連續動力學曲線配合跳躍稀釋實驗，可從 kinact/Ki 與停留時間兩個維度把可逆、不可逆、與時間相關的抑制模式分開。

【五、關于采購與本品牌的常見疑問】

? Q1：國內通過什么渠道采購 AssayQuant 產品？

?A：美國 AssayQuant Technologies 的產品在國內由上海起發實驗試劑有限公司作為特約代理經銷商提供服務，包括貨期確認、目錄選型、定制底物咨詢與售后技術對接。

? Q2：試劑盒到貨后保質期與存儲有什么要注意的？

?A：傳感器肽底物類組份對光與凍融較敏感，建議收貨后立即按標簽溫度避光存放，-20℃ 條件下避免多次凍融；ATP、緩沖液等組份按說明書指定溫度即可。具體某款產品的開封后穩定期以說明書為準。

? Q3：現有酶標儀能不能直接用？

?A：只要設備具備熒光強度通道（360 nm 激發 / 485 nm 發射），連續 FI 格式即可直接跑；紅移 TRF 格式需要設備支持時間分辨熒光讀取（360 nm 激發 / 620 nm 發射，帶延遲門控）。目前主流多模式酶標儀大多覆蓋這兩組參數。

? Q4：粗裂解物里內源激酶/磷酸酶會不會干擾？

?A：PhosphoSens 傳感器本身是按單一靶點序列優化的，對目標酶有選擇性，但仍建議先做空白裂解物對照，確認背景斜率在可接受范圍。若背景偏高，可調整裂解物投入量或縮短孵育窗口。

? Q5：ATP 濃度能不能自己改？

?A：可以。PhosphoSens 不綁定特定 ATP 濃度，K? 與 Km 類參數求解時反而需要設多個 ATP 梯度。注意 Mg2? 需與 ATP 等摩爾或略過量，以保證 Sox 螯合效率。

? Q6：如果想測的靶點在目錄里沒有怎么辦？

?A：AssayQuant 提供定制傳感器設計服務，依托超過 50,000 條 CSx 肽庫的篩選經驗，可為冷門激酶或磷酸酶、或其突變體位點開發對應傳感器。國內需求可通過上海起發實驗試劑有限公司對接技術團隊評估周期與報價。

? Q7：一套試劑盒大概能做多少孔？

?A：以 384 孔板、每孔 20–30 μL 反應體積估算，10 nmol 規格的傳感器肽通常可支撐數十板至上百板規模，具體取決于單孔肽濃度設定。目錄試劑盒的規格說明中會給出推薦工作濃度區間。

【特約經銷】

上海起發實驗試劑有限公司為美國AssayQuant Technologies特約代理經銷商，負責其在國內的產品供應與技術對接。如需索取目錄、詢價或咨詢定制底物開發，可通過上海起發實驗試劑有限公司常規聯絡方式接洽。

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更多產品信息，請聯系AssayQuant Technologies特約代理經銷商：上海起發實驗試劑有限公司

（注：本文內容基于品牌公開資料及行業常規信息整理，具體以品牌信息文檔為準。）

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